陶瓷珠在RNA提取中主要用于样品前处理的研磨破碎步骤,其高密度和化学稳定性可有效破碎细胞释放核酸,常与磁珠法联用提高提取效率。以下是关键要点:
一、陶瓷珠的选择标准
粒径:2.8mm直径更适合动物组织(10-20mg)或植物样本(50mg),过小(如1.4mm)可能需延长研磨时间导致RNA降解;
材质:氧化锆珠因高耐磨性和惰性表面,可减少RNA吸附损失;
配套设备:水平放置的珠磨仪(如PowerLyzer)可缩短研磨时间,减少发热对RNA完整性的影响。
二、操作流程(以海藻样本为例)
研磨裂解:EP管中加入2-3颗陶瓷珠、裂解液和样本,液氮研磨后4℃裂解10分钟;
磁珠结合:上清与磁珠混合,通过磁场分离RNA-磁珠复合物;
洗涤洗脱:用含乙醇的缓冲液去除杂质,低盐溶液洗脱RNA。
三、注意事项
防降解:全程使用RNase抑制剂,样本需快速处理或-80℃保存;
磁珠匹配:选择硅基或羧基磁珠,避免冷冻保存导致表面结构破坏;
四、常见问题解决
低产量:增加裂解液体积或减少起始样本量,避免纯化柱过载;
DNA污染:DNase I处理或跨外显子设计qPCR引物;
PCR抑制:磁珠使用量需优化,高浓度可能引入铁离子干扰。