以下是针对实验室研磨珠蛋白提取的标准化操作要点，综合研磨珠选择、样本适配及提取流程：
一、研磨珠选择与配比原则
材质选择
氧化锆珠：高密度（6.0 g/cm³）、高硬度（莫氏硬度9级），耐磨性强且化学惰性，避免蛋白污染，适用于动物/植物组织。
陶瓷/不锈钢珠：适合非酸性样本，需避免金属污染时选陶瓷珠。
禁用混合材质：不同尺寸或材质的研磨珠混用会导致相互磨损，加速破碎。
粒径匹配
样本类型 推荐研磨珠粒径
细菌、单细胞 0.1–0.5 mm
酵母、真菌 0.5 mm
常规动物/植物组织 1.0 mm
纤维/坚硬组织（如皮肤、肌腱） 2.0 mm 或更高密度珠
用量与填充
研磨珠体积占比：研磨罐容积的 70%–85%（过低效率差，过高设备卡顿）。
样本与裂解液比例：1 mg 组织 : 10 μL RIPA 裂解液（含蛋白酶/磷酸酶抑制剂）。
（插入研磨珠实物对比图：0.1mm/1mm/2mm锆珠、不同材质研磨珠）
二、分步操作流程
样本预处理
组织块用预冷 PBS 冲洗去血污，滤纸吸干；骨组织需液氮预冷粉碎。
研磨程序
参数设置：
频率：60 Hz（冷冻研磨仪）。
时间：常规组织 60秒×3循环（间隔冰浴防过热），坚硬组织延长至 90秒×4循环。
关键操作：
加入裂解液与研磨珠后，立即置于 4℃环境 研磨。
（展示液氮预冷骨组织→研磨仪操作→离心取上清流程）
裂解与离心
研磨后冰浴静置 30 分钟（或超声辅助：5秒开/关，5–8循环）。
4℃ 离心（15,000 rpm，15分钟），取中层上清避开脂层。
蛋白定量与保存
BCA 法测定浓度，Loading Buffer 煮沸 10 分钟后 -80℃ 保存。
三、关键注意事项
避免污染
研磨前用乙醇清洁研磨罐及珠子，操作者佩戴手套口罩防角蛋白污染。
温度控制
全程冰上操作，研磨仪开启冷却系统（防止蛋白变性）。
特殊样本处理
脂肪组织：离心后移除上层脂膜。
含色素植物：液氮研磨后加冷丙酮沉淀色素。
（扩展阅读卡片：氧化锆珠性能对比/不同组织研磨方案/抑制剂选择指南）
注：若提取RNA需用DNase处理，蛋白质提取则省略此步。
流程优化建议：骨组织优先选 2.0mm氧化锆珠，植物样本搭配 液氮+丙酮沉淀 可提升纯度。
