市场上有一种以磁力工具进行抽提的试剂盒,它无需任何有机溶剂和反复离心、真空抽滤或柱分离等繁琐的步骤,而是基于改良的碱裂解步骤和核酸结合磁颗粒的过程。磁力工具可用于捕获结合有核酸的磁颗粒,用漂洗缓冲液洗去杂质,洗脱缓冲液可把核酸从磁性颗粒上洗脱下来,从而达到分离核酸的目的。其操作步骤为:裂解—结合—洗涤—洗脱(图)。另有一种抽提试剂盒,通过一个带有保护盖的磁棒来捕获磁颗粒。将磁棒伸入装有样品的容器,吸引磁颗粒,然后放置到另一个容器中去释放磁颗粒。这种方法它结合了硅胶柱纯化的快速、高效和磁珠纯化的简便操作。
磁珠分离技术是一种简单高效的核酸提纯方法。磁珠法核酸提取试剂盒,是生物科学和纳米材料相结合的高新技术产品。其基本原理是:磁珠表面连接了可特异地与DNA发生作用的功能基团,具有可逆吸附DNA的特性,通常采用带有氨基、巯基、环氧基等基团的活化试剂对磁珠表面包覆的高分子进行化学修饰。也可用纳米技术对超顺磁性纳米颗粒的表面进行改良和表面修饰后,制备成超顺磁性氧化硅纳米磁珠。磁珠能与核酸分子特异性地识别和高效结合。在外加磁场的作用下,把血液、动物组织、食品、病原微生物等样本中的核酸分离出来。这种方法不需要有机溶剂,大大减轻了对实验工作人员的伤害,而且可以实现自动化。该方法可应用在临床疾病诊断、输血安全、法医学鉴定、环境微生物检测、食品安全检测、分子生物学研究等多种领域。
用氧化锆珠纯化核酸是另一种类型的磁珠纯化方法。这些微球形的磁珠具有较大的结合表面,并且可以分散在溶液中。这些特征使得核酸的结合、漂洗和洗脱都很彻底。有一种核酸抽提试剂盒就是运用该方法进行核酸的纯化,用含氧化锆珠的硫氰酸胍对样品进行机械破碎,可使样本释放核酸,同时也使样品基质中的核酸酶失活。样品裂解后,用异丙醇稀释样品;然后加入磁珠结合核酸,磁珠和核酸的混合物被固定在磁体上;漂洗除去蛋白质和其他杂质,再次漂洗则除去残留的结合溶液;然后用低盐缓冲液洗脱核酸。
基于固相可逆的固定化顺磁珠技术已被用于PCR纯化系统来获取优质DNA。其原理是:PCR扩增子结合到顺磁颗粒后从溶液中被吸出去,dNTP、引物和盐类等杂质可被漂洗冲走。这种方法的流程非常简单,无需离心和过滤。
另外还有利用多聚物(如可磁化的纤维素)包裹磁性或顺磁性颗粒为材料制成磁珠。在一定的盐浓度和聚亚烃基乙二醇条件下,这种磁化纤维素可结合核酸。小片段核酸在高盐浓度下与可磁化纤维素颗粒牢固结合,然后根据核酸片段大小选择不同的盐浓度来释放结合在磁化纤维素上的核酸,再用适当的漂洗缓冲液洗涤结合有核酸的磁化纤维素,然后用合适的洗脱缓冲液将靶核酸与纤维素分离。在纯化时,利用磁场吸引磁化纤维素或将其吸引到管壁,使其与上清分离。该磁化纤维素中含有高达90%的氧化铁,纤维素中磁性成分也可用其他磁性化合物如氧化亚铁或氧化镍代替。



